Indagini di controllo qualità sui vaccini: micro e nanocontaminazione

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I risultati di questa nuova indagine mostrano la presenza di particolato micro e nano-dimensioni composto da elementi inorganici nei campioni di vaccini che non è dichiarato tra i componenti e la cui presenza indebitamente è, per il momento, inspiegabile.

Antonietta M Gatti, 1,2  Stefano Montanari 3

1 Consiglio Nazionale delle Ricerche in Italia, Istituto per la Scienza e la Tecnologia della Ceramica, Italia 
2 International Clean Water Institute, USA 
3 Nanodiagnostics srl, Italy

Corrispondenza: Dott.ssa Antonietta Gatti, Consiglio Nazionale delle Ricerche d'Italia, c / o Nanodiagnostica Via E. Fermi, 1 / L, 41057 San Vito (MO), Italia, Tel 59798778

Ricevuto: 30 novembre 2016 | Pubblicato: 23 gennaio 2017

Citazione: Gatti AM, Montanari S (2016) Nuove indagini di controllo qualità sui vaccini: micro e nanocontaminazione. Vaccini Int J Vaccino 4 (1): 00072. DOI: 10.15406 / ijvv.2017.04.00072

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Astratto

I vaccini sono sotto inchiesta per i possibili effetti collaterali che possono causare. Al fine di fornire nuove informazioni, è stato applicato un metodo di indagine al microscopio elettronico allo studio dei vaccini, finalizzato alla verifica della presenza di contaminanti solidi mediante un microscopio elettronico a scansione ambientale dotato di una microsonda a raggi X. I risultati di questa nuova indagine mostrano la presenza di particolato micro e nano-dimensioni composto da elementi inorganici nei campioni di vaccini che non è dichiarato tra i componenti e la cui presenza indebitamente è, per il momento, inspiegabile. Una parte considerevole di questi contaminanti da particolato è già stata verificata in altre matrici e riportata in letteratura come non biodegradabile e non biocompatibile.

Parole chiave: vaccino; Malattia; Contaminazione; Corona proteica; biocompatibilità; Tossicità; Nano particella; immunogenicità; Corpo estraneo; Ambiente; Processo industriale; Controllo di qualità

introduzione

I vaccini sono una delle invenzioni più importanti intese a proteggere le persone dalle malattie infettive. La pratica della varietà è vecchia di secoli ed è menzionata in documenti cinesi e indiani risalenti al 1000 d.C. Nel corso del tempo, la varietà è stata sostituita dalla vaccinazione, i vaccini sono stati migliorati in termini di tecnologia e la pratica della vaccinazione è ora standardizzata in tutto il mondo.

Gli effetti collaterali sono sempre stati segnalati, ma negli ultimi anni sembra che siano aumentati in numero e gravità, in particolare nei bambini come riporta l'Accademia americana di pediatria [1,2]. Ad esempio, il vaccino contro la difterite-tetano-pertosse (DTaP) era collegato a casi di sindrome della morte improvvisa del bambino (SIDS) [3]; vaccino contro morbillo-parotite-rosolia con autismo [4,5]; immunizzazioni multiple con disturbi immunitari [6]; vaccini contro l'epatite B con sclerosi multipla, ecc.

L'avviso di Tripedia DTaP di Sanofi Pasteur riporta che “Gli eventi avversi segnalati durante l'uso post-approvazione del vaccino Tripedia includono porpora trombocitopenica idiopatica, SIDS, reazione anafilattica, cellulite, autismo, convulsioni / convulsioni / grand mal convulsioni, encefalopatia, ipotonia, neuropatia, sonnolenza e apnea ”. Gli studi epidemiologici effettuati non hanno mostrato una chiara evidenza di tali associazioni, anche se nel 2011 la National Academy of Medicine (ex IOM) ha ammesso: "I vaccini non sono esenti da effetti collaterali o effetti avversi" [7].

Ricerche specifiche su componenti dei vaccini come adiuvanti (nella maggior parte dei casi, sali di alluminio) sono già indicate come possibili responsabili dei sintomi neurologici [8-10] e in alcuni casi, test in vivo e studi epidemiologici hanno dimostrato una possibile correlazione con malattie neurologiche [10,11]. I danni neurologici indotti in pazienti in emodialisi trattati con acqua contenente alluminio sono riportati in letteratura [12].

Recentemente, con i vaccini adottati in tutto il mondo contro il Papillomavirus umano (HPV), il dibattito è stato risvegliato a causa di alcuni effetti avversi segnalati da alcuni giovani soggetti.

Studi specifici hanno comunicato l'esistenza di sintomi correlati a sindromi mai descritte prima sviluppate dopo la somministrazione del vaccino. Ad esempio, Sindrome da dolore regionale complesso (CRPS), Sindrome da tachicardia posturale ortostatica (POTS) e Sindrome da affaticamento cronico (CFS) [13]. Gli effetti collaterali che possono insorgere in un tempo relativamente breve possono essere locali o sistemici.

Sono descritti dolore nel sito di iniezione, gonfiore e movimento incontrollabile delle mani (sebbene quest'ultimo sintomo possa anche essere considerato sistemico). Tra gli effetti sistemici, febbre, mal di testa, irritabilità, convulsioni epilettiche, perdita temporanea del linguaggio, disestesia e paresi degli arti inferiori, vampate di calore, disturbi del sonno, reazioni di ipersensibilità, dolore muscolare, sincope ricorrente, fame costante, significativa alterazione dell'andatura, incapacità di mantenere sono riportate la postura ortostatica [14].

È un dato di fatto che ogni giorno vengono somministrati milioni di dosi di vaccino e non accade nulla di rilevante, ma è anche irrefutabile che, indipendentemente dalla quantità di effetti collaterali che non sono stati registrati e la cui percentuale rimane in realtà sconosciuta, in un numero limitato di casi si verifica qualcosa di sbagliato. Non è stata data alcuna spiegazione soddisfacente o, in molti casi, nessuna spiegazione e sembra che tali effetti avversi si verifichino su base casuale e stocastica.

Tali situazioni ci hanno indotto a verificare la sicurezza dei vaccini da un punto di vista mai adottato prima: non un approccio biologico, ma fisico. Quindi, abbiamo sviluppato un nuovo metodo di analisi basato sull'uso di una indagine sul microscopio elettronico a scansione ambientale a pistola ad emissione di campo per rilevare possibili contaminazioni fisiche in tali prodotti.

Materiali e metodi

Sono stati analizzati 44 tipi di vaccini provenienti da 2 paesi (Italia e Francia). La tabella 1 li raggruppa in termini di nome, marchio e scopo.

N	Nome	Marchio, Paese di distribuzione	Descrizione	Lotto di produzione, data di scadenza
1	Vivotif Berna	Berna Biotech SA, Italia	Vaccino anti-tiroide (vivo), gruppo Ty21a	3000336 [2004]
2	Typhim Vi	Aventis Pasteur MSD, Italia	Vaccino anti-Salmonella typhi	U1510-2 [2004]
3	Typherix	GlaxoSmithKline Spa, Italia	Vaccino anti-ipoide (polisaccaride Vi)	ATYPB061BB [2009]
4	Anatetall	Chirone (ora Novartis) Italia	Vaccino antitetanico adsorbito	030106 [2004]
5	Anatetall	Vaccini e diagnostica Novartis, Italia	Vaccino antitetanico adsorbito	060510 [2009]
6	Tetabulin	Baxter AG, Italia	Vaccino antitetanico adsorbito	VNG2G006A [2009]
7	Dif-Tet-All	Vaccini e diagnostica Novartis, Italia	Vaccino adsorbito anti-tetano e difterite	070501 [2009]
8	Infanrix	GlaxoSmithKline Spa, Italia	Vaccino anti-difterite, tetano e pertosse	AC14B071AJ [2009]
9	Infanrix hexa	GlaxoSmithKline Biologicals s, Italia	Anti-difterite, tetano, pertosse, epatite B, poliomielite e malattia causata da Haemophilus influenzae di tipo b	A21CC512A [2017]
10	Infanrix hexa	GlaxoSmithKline Biologicals in Francia	Anti-difterite, tetano, pertosse, epatite B, poliomielite e malattia causata da Haemophilus influenzae di tipo b	A21CC421A [2017]
11	MMR vaxPro	Sanofi Pasteur MSD, Italia	MMR vaxPro (morbillo, parotite e rosolia) analizzato a Cambridge	L012437 [2017]
12	Repevax	Sanofi Pasteur MSD, Francia	Anti-difterite-tetano-pertosse-vaccino antipolio	L0362-1 [2017]
13	Repevax	Sanofi Pasteur MSD SNC France	Anti-difterite-tetano-pertosse-vaccino antipolio	L0033-1 [2016]
14	Priorix	GlaxoSmithKline Spa, Italia	Vaccino anti - morbillo-parotite e rosolia (MMR)	A69CB550A [2009]
15	Morupar	Chirone (ora Novartis,), Italia	Vaccino anti-morbillo-parotite e rosolia (MMR)	7601 [2004]
16	Varilrix	GlaxoSmithKline Spa, Italia	Vaccino contro la varicella (gruppo OKA)	A70CA567A [2009]
17	Stamaril Pasteur	Sanofi Pasteur MSD, Italia	vaccino contro la febbre gialla	A5329-6 [2009]
18	Allergoid-Adsorbat 6-Graser Starke B.	Allergopharma, Germania	Vaccino antiallergico	Ch-B.:30005999-B [2006]
19	Engerix-B	GlaxoSmithKline Spa, Italia	Vaccino adsorbito anti-epatite B.	AHBVB468BD [2009]
20	Prenevar 13	Pfizer, Italia	Vaccino anti-pneumococco	G79324 [2013]
21	Prevenar 13	Pfizer, Francia	Vaccino anti-pneumococco	N27430 [2018]
22	Mencevax Acwy	GlaxoSmithKline, Italia	Vaccino anti-Neisseria meningococcico gruppo A, C, W135 e Y.	N402A47B 12 [2004]
23	Meningitec	Pfizer, Italia	(gruppo C 10) (adsorbito su Al-fosfato)	H92709 [2015]
24	Meningitec	Pfizer-Italia	Vaccino anti-meningococco (gruppo C 10) (adsorbito su Al-fosfato)	H20500 [2014]
25	Meningitec	Pfizer-Italia	Vaccino anti-meningococco sequestrato da Procura della Repubblica	G76673 [2014]
26	Meningitec	Pfizer-Italia	Vaccino anti-meningococco sequestrato da Procura della Repubblica	H99459 [2015]
27	Meningitec	Pfizer-Italia	Vaccino anti-meningococco sequestrato da Procura della Repubblica	H52269 [2015]
28	Menjugate	Vaccini e diagnostica Novartis	Gruppo anti-meningococco C	YA0163AB [2010]
29	Menveo	Vaccini e diagnostica Novartis	Gruppi antimeningococcici A, C, W135, Y	A15083 [2017]
30	Meningitec	Wyeth Pharmaceutical - Francia	Vaccino anti-meningococco di gruppo C.	E83920 [2011]
31	Inflessale V	Berna Biotech	Vaccino antinfluenzale 2008/2009	3001463-01 [2009]
32	Vaxigrip	Sanofi Pasteur MSD	Vaccino antinfluenzale 2008/2009	D9703-1 [2009]
33	Vaxigrip	Sanofi Pasteur	Vaccino antinfluenzale 2012/2013	J8401-1 [2013]
34	Vaxigrip	Sanofi Pasteur, Italia	Vaccino antinfluenzale, con virus inattivato e diviso	M7319-1 [2016]
35	Focetria	Vaccini e diagnostica Novartis	Vaccino anti-pandemia H1N1	0902401 [2010]
36	AGRIPPAL	Novartis	Vaccino antinfluenzale 2012/2013	127002A [2013]
37	AGRIPPAL	Vaccini Novartis, Italia	Vaccino antinfluenzale con virus inattivato e diviso 2015/2016 -	152803 [2016]
38	Agrippal S1	Vaccini e diagnostica Novartis	Antigene inattivato / superficiale antinfluenzale v - 2014/2015	147302A [2015]
39	Fluarix	GlaxoSmithKline - GSK	Vaccino antinfluenzale 2013	AFLUA789AA [2014]
40	Fluad	Vaccini e diagnostica Novartis	Vaccino antigene inattivato / superficiale antinfluenzale - 2014/2015	142502 [2015]
41	Gardasil	Sanofi Pasteur MSD, Italia	Vaccino anti-HPV di tipo 6,11,16,18	NP01250 [2012]
42	Gardasil	Sanofi Pasteur MSD, Italia	Vaccino anti-HPV (tipi 6,11,16,18)	K023804 [2016]
43	Cervarix	GlaxoSmithKline Biological, Italia	Anti-HPV (tipo 16,18)	AHPVA238AX [2017]
44	Feligen CRP	Virbac SA - Carros - Italia	anti-panleucopenia, rinotracheite infettiva e infezioni da Calcivirus, vaccino veterinario per gatti	3R4R [2013]

Tabella 1: Elenco dei vaccini analizzati, in base al loro scopo.

Alcuni vaccini, in effetti una minoranza, hanno lo scopo di trattare un singolo batterio o virus, mentre altri sono multi-valenti. L'elenco dei vaccini che abbiamo analizzato può contenere nomi ripetuti, perché abbiamo considerato lotti diversi e anni di produzione dello stesso vaccino: quelli contro l'influenza in particolare.

Lo studio mirava a verificare una possibile contaminazione fisica. Per fare ciò, abbiamo eseguito un nuovo tipo di indagine basata su osservazioni nell'ambito di un microscopio a scansione di elettroni ambientali a cannone ad emissione di campo (FEG-ESEM, Quanta 200, FEI, Paesi Bassi) dotato della microprobe a raggi X di uno spettroscopio a dispersione di energia (EDS , EDAX, Mahwah, NJ, USA) per rilevare la possibile presenza di contaminanti inorganici, particolati e identificarne la composizione chimica.

Una siringa di circa 20 microlitri di vaccino viene rilasciata dalla siringa su un filtro in cellulosa di diametro 25 mm (Millipore, USA), all'interno di un armadio di flusso. Il filtro viene quindi depositato su un troncone di alluminio coperto da un disco di carbonio adesivo. Il campione viene immediatamente messo in una scatola pulita per evitare qualsiasi contaminazione e la scatola viene riaperta solo per il campione da inserire all'interno della camera FEG-ESEM. Abbiamo selezionato quel particolare tipo di microscopio in quanto consente di analizzare campioni acquosi e oleosi sotto vuoto (da 10 a 130 Pa) ad alta sensibilità.

Quando l'acqua e la soluzione salina contenute nel vaccino vengono evaporate, i componenti biologici / fisici emergono sul filtro ed è quindi possibile osservarli. Questo tipo di microscopio (osservazioni a basso vuoto) impedisce la possibile contaminazione del campione e la creazione di artefatti. Le osservazioni sono fatte con diversi sensori (SE: sensore di elettroni secondari e BSE: sensore di elettroni retrodiffusi) e vengono eseguite a una pressione di 8,9 e-1 mbar, a energie comprese tra 10 e 30kV per rilevare le dimensioni del particolato, morfologia e sua composizione elementare. Il metodo identifica corpi chiaramente inorganici con una densità atomica più elevata (dall'aspetto più bianco) rispetto al substrato biologico. Quindi, le entità organiche sono visibili e facili da distinguere da quelle inorganiche. Il metodo non è in grado di distinguere tra proteine ​​e adiuvanti organici (ad es squalene, glutammato, proteine, ecc.) o virus, batteri, DNA dei batteri, endo-tossine e rifiuti dei batteri, ma la loro densità atomica relativamente bassa ci consente di identificare queste entità come materia organica. In alcuni vaccini, la sostanza organica contiene detriti dall'aspetto bianco chiamati aggregati, mentre un'alta concentrazione o detriti inorganici è chiamata cluster.

Vengono identificate, valutate e conteggiate singole particelle inorganiche o aggregati organico-inorganici. La procedura di conteggio viene ripetuta tre volte da tre diversi operatori, con un errore inferiore al 10%. Quando viene rilevato uno strato di sali (cloruro di sodio o alluminio), registriamo la situazione ma non facciamo il conteggio del corpo.

risultati

Le indagini hanno verificato la composizione fisico-chimica dei vaccini considerati in base al componente inorganico dichiarato dal produttore. Nel dettaglio, abbiamo verificato la presenza di sali salini e di alluminio, ma è stata identificata in ogni caso un'ulteriore presenza di corpi estranei microorganici, submicroscopici e nanosized (inorganici, che vanno da 100 nm a circa dieci micron), la cui presenza non era dichiarato negli opuscoli consegnati nella confezione del prodotto (Tabella 2).

N	Azienda	Nome	alluminio	Elementi identificati
1	Allergopharma - Germania	allergoidi	sì	Al
2	Aventis Pasteur MSD Lyon - Francie	Typhim Vi	no	BrKP, PbSi, FeCr, PbClSiTi
3	Baxter AG	Tetabulin	no	SiMg, Fe, SiTiAl, SBa, Zn
4	Berna Biotech	Vivotif Berna	no	FeAl, ZrAlHf, SrAl, BiAlCl
5	Berna Biotech	Inflessale V	no	CuSnPbZn, Fe, CaSiAl, SiAl, NaPZn, ZnP, AlSiTi
6	Chiron	Anatetall	Al (OH) 3	FeAl, SZnBaAl
7	Chiron	Morupar	no	/
8	GlaxoSmithKline- Belgio	Mencevax ACWY	no	FeCrNi, ZrAl, FeCrNiZrAlSi
9	GlaxoSmithKline	Infanrix	Al (OH) 3	Al, AlTi, AlSi
10	GlaxoSmithKline Biologicals	Infanrix hexa	Al (OH) 3	SBa, FeCu, SiAl, FeSi, CaMgSi, AlCaSi, Ti, Au, SCa, SiAlFeSnCuCrZn, CaAlSi
11	GlaxoSmithKline Biologicals	Infanrix hexa	Al (OH) 3 , AlPO 4. 2H 2 O	W, FeCrNi, Ti
12	GlaxoSmithKline	Typherix	no	Ti, TiW, AlSiTiWCr, SBa, W, SiAl, AlSiTi
13	GlaxoSmithKline	Priorix	no	WCa, WFeCu, SiAl, SiMg, PbFe, Ti, WNiFe
14	GlaxoSmithKline	Engerix-B	no	Al (precipitati)
15	GlaxoSmithKline	Varilrix	no	FeZn, FeSi, AlSiFe, SiAlTiFe, MgSi, Ti, Zr, Bi
16	GlaxoSmithKline	Fluarix	no	AlCu, Fe, AlBi, Si, SiZn, AlCuFe, SiMg, SBa, AlCuBi, FeCrNi, SPZn
17	GlaxoSmithKline Biologicals	Cervarix	Al (OH) 3	AlSi, FeAl, SiMg, CaSiAl, CaZn, FeAlSi, FeCr, CuSnPb
18	Vaccini e diagnostica Novartis	Anatetall	Al (OH) 3	Al, FeCrNi, AlCr, AlFe, BaS, ZnAl
19	Vaccini e diagnostica Novartis	Dif-Tet-All	Al (OH) 3	Fe, SBa, SiSBa, AlZnCu, AlZnFeCr
20	Vaccini e diagnostica Novartis	Kit menugato	Al (OH) 3	SiAl, Ti, FeZn, Fe, Sb, SiAlFeTi, W, Zr
21	Vaccini e diagnostica Novartis	Focetria	no	Fe, FeCrNiCu, FeCrNi, SiFeCrNi, Cr, SiAlFe, AlSiTiFe, AlSi, SiMgFe, Si, FeZn
22	Novartis	Agrippal S1	no	Ca, Fe, SBa, SBaZn, Cr, Si, Pb, Bi, e FeSiAlCr, SiAlSBaFe, CaAlSi, Zn, CeFeTiNi, FeCrNi
23	Vaccini e diagnostica Novartis	Agrippal S1	no	SiAlK, Si, SiMgFe, CaSiAl, SBaZn
24	Vaccini Novartis	AGRIPPAL	no	Cr, Ca, SiCaAl, ZrSi, SBa, CuZn, SCa
25	Vaccini e diagnostica Novartis S	Fluad	no	CaSiAl, FeSiTi, SiMgAlFe, SBa
26	Vaccini e diagnostica Novartis	Menveo	no	CaSiAl, SiAlFe, FeCrNi, Fe, Al, SBa
27	Pfizer	Prenevar 13	no	FeCr
28	Pfizer	Prevenar 13	no	W, CaAlSi, Al, CaSiAlFe, FeS, FeCr, FeCrNi, Fe,, CaP, FeTiMn, Ba, SiMgAlFe
29	Pfizer	Meningitec - ctrl	no	Cr, Si
30	Pfizer	Meningitec - ctrl	no	FeCrNi, W
31	Pfizer	Meningitec	no	CaSiAl, CaSi, SiAlFeTi, FeCrNi, W, Fe, Pb
32	Pfizer	Meningitec	no	Cr (precipitati), Ca, AlSi
33	Pfizer	Meningitec	no	W, SiCa, CaSi, Pb, FeCrNi, Cr
34	Wyeth Pharmaceutical - Regno Unito	Meningitec	no	SiAlFe, SiAlTi, SiMgFe, W, Fe, Zr, Pb, Ca, Zn, FeCrNi
35	Sanofi Pasteur MSD-France	Vaxigrip	no	Fe, FeCrNi, SiAlFe, AlSi, SiAlFeCr
36	Sanofi Pasteur MSD	Stamaril Pasteur	no	CaSiAl, AlSi, Fe, SiMgFe, SiMgAlFe, CrSiFeCr, CrSiCuFe
37	Sanofi Pasteur MSD	Gardasil	AlPO 4 . 2H 2 O	AlCuFe, PbBi, Pb, Bi, Fe
38	Sanifi Pasteur MSD	Gardasil	AlPO 4 . 2H 2 O	CaAlSi, AlSi, SiMgFe, Al, Fe, AlCuFe, FeSiAl, BiBaS, Ti, TiAlSi
39	Sanofi Pasteur	Vaxigrip	no	Ca, CrFe, FeCrNi, CaSZn, CaSiAlTiFe, Ag, Fe
40	Sanofi Pasteur	Vaxigrip	no	SiMgFe, CaSiAl, AlSiFe, AlSi, FeCr, FeZn, Fe
41	Sanofi Pasteur MSD	Repevax	AlPO 4 .2H 2 O	Bi, Fe, AlSiFe, SiMg, SBa, Ca
42	Sanofi Pasteur MSD S	Repevax	AlPO 4 .2H 2 O	Ti, Br, AuCuZn, Ca, SiZn, SiAuAgCu, SiMgFe, FeCrNi.AlSiMgTiMnCrFe, SiFeCrNi, FeAl
43	Sanofi Pasteur MSD	MMR vaxPro	no	Si, SiFeCrNi, FeCrNi, FeNi, Fe, SCa, AlSiCa, CaAlSiFeV, SBa, Pt, PtAgBiFeCr
44	Virbac SA - Carros - Francia	Feligen CRP	no	Ca, SiAl

Tabella 2: Elenco dei vaccini secondo i loro produttori con la composizione chimica dei detriti identificati in ciascun campione. Vengono riportati gli elementi più rappresentati.

La Figura 1a mostra uno strato di cristalli di cloruro di sodio (NaCl) che incorporano sali di fosfato di alluminio (AlPO 

4 ) in una goccia di Gardasil (vaccino anti-HPV di Merck), come mostra lo spettro EDS (Figura 1b). La soluzione salina è la base fluida di qualsiasi preparazione del vaccino e i sali di alluminio o l'idrossido di alluminio [Al (OH) 3 ] sono gli adiuvanti che vengono solitamente aggiunti.

Guardando l'area al di fuori di questi precipitati ma all'interno della goccia di liquido, abbiamo identificato altre cose: singole particelle, gruppi di particelle e aggregati (composti organici-inorganici) che sono dovuti a un'interazione del particolato inorganico con la parte organica del vaccino .

Figura 1: Cristalli di soluzione salina e fosfato di alluminio e spettri EDS corrispondenti.

La Figura 2a-2f mostra la diversa tipologia di entità identificate nei vaccini (Repevax, Prevenar e Gardasil); particelle singole, cluster di micro e nanoparticelle (<100 nm) e aggregati con i loro spettri EDS (Figura 2d-2f). Le immagini (Figura 2a e 2d) mostrano detriti di Alluminio, Silicio, Magnesio e Titanio; di particelle di ferro, cromo, silicio e calcio (Figura 2b e 2e) disposte in un cluster e detriti di alluminio e rame (Figura 2c & 2f) in un aggregato.

Figura 2: Immagini di singole particelle, cluster di micro e nanoparticelle (<100 nm) e aggregati con i loro spettri EDS. Sono rispettivamente composti da (a, b) alluminio, silicio, magnesio, titanio, cromo, manganese, ferro, (c, d) ferro, silicio, titanio di calcio, cromo, (e, f) alluminio, rame. Le frecce mostrano i punti in cui sono stati rilevati gli spettri EDS.

Come si può vedere, le particelle sono circondate e incorporate in un substrato biologico. In tutti i campioni analizzati, abbiamo identificato particelle contenenti: Piombo (Typhym, Cervarix, Agrippal S1, Meningitec, Gardasil) o acciaio inossidabile (Mencevax, Infarix Hexa, Cervarix. Anatetall, Focetria, Agrippal S1, Menveo, Prevenar 13, Meningitec, Vaxigrip , Stamaril Pasteur, Repevax e MMRvaxPro).

La Figura 3a-3d mostra particelle di tungsteno identificate in gocce di Prevenar e Infarix (alluminio, tungsteno, cloruro di calcio).

Figura 3: Immagini di particelle di tungsteno identificate in gocce di Prevenar e Infarix. Sono composti rispettivamente da tungsteno, alluminio, ferro ma in diverse concentrazioni. Le frecce mostrano i punti in cui sono stati rilevati gli spettri EDS.

La Figura 4a-4d presenta detriti singolari trovati in Repevax (silicio, oro, argento) e Gardasil (zirconio).

Figura 4: Le immagini mostrano esempi di nano biointerazione. L'aggregato (a, b) identificato in Gardasil contiene nanoparticelle di cloro, silicio, alluminio, zirconio, mentre i detriti trovati in Repevax contengono silicio, oro, argento (c, d). Le frecce mostrano i punti in cui sono stati rilevati gli spettri EDS.

Sono state inoltre identificate alcune particelle metalliche di tungsteno o acciaio inossidabile. Altre particelle contenenti zirconio, afnio, stronzio e alluminio (Vivotif, Meningetec); Tungsteno, Nichel, Ferro (Priorix, Meningetec); Antimonio (kit di Menjugate); Cromo (meningetec); Sono stati trovati anche oro o oro, zinco (Infarix Hexa, Repevax) o platino, argento, bismuto, ferro, cromo (MMRvaxPro) o piombo, bismuto (Gardasil) o cerio (Agrippal S1). L'unico tungsteno appare nei vaccini 8/44, mentre il cromo (da solo o in lega con ferro e nichel) nel 25/44. Le indagini hanno rivelato che alcune particelle sono incorporate in un substrato biologico, probabilmente proteine, endo-tossine e residui di batteri. Non appena una particella viene a contatto con fluidi proteici, si verifica una nano-biointerazione [6] e si forma una "corona proteica" [7-10].

La Figura 5a-5f mostra esempi di queste nano-bio-interazioni. Si possono vedere aggregati (entità composite stabili) contenenti particelle di piombo in Meningitec, (Figura 5a e 5b) di acciaio inossidabile (ferro, cromo e nichel, figura 5c e 5d) e di rame, zinco e piombo in Cervarix (Figura 5e & 5f). Aggregati simili, sebbene in diverse situazioni (pazienti che soffrono di leucemia o crioglobulinemia), sono già stati descritti in letteratura.

Figura 5: mostra particelle circondate da un composto organico. Sono composti da piombo (a, b), ferro, cromo, nichel (acciaio inossidabile; c, d), rame, stagno, piombo (e, f). Le frecce mostrano i punti in cui sono stati rilevati gli spettri EDS.

Il legame tra queste due entità genera uno sviluppo delle proteine ​​che può indurre un effetto autoimmune una volta che tali proteine ​​vengono iniettate nell'uomo.

Le figure 6a e 6b mostrano uno dei corpi estranei identificati in Agrippal. La particella è composta da cerio, ferro, titanio e nichel. (Figure 7a e 7b) presentano un'area di Repevax in cui la morfologia dei globuli rossi - non possiamo dire se sono umani o animali - è chiaramente visibile.

Figura 6: mostra un aggregato organico contenente detriti di cerio, ferro, nichel, titanio. La freccia rossa indica lo strato organico (meno atomicamente denso) che copre la particella di cerio.

Figura 7: Immagine di un'area in una goccia di Repevax in cui è stata identificata la morfologia dei globuli rossi (frecce rosse). È impossibile sapere se sono di origine umana o animale. Tra i detriti di soluzione salina e fosfato di alluminio, vi è la presenza di detriti (frecce bianche) composti da alluminio, bromo, silicio, potassio, titanio.

La tabella 3 riassume il numero e la morfologia dei detriti identificati, in termini di singole particelle, gruppi di particelle o aggregati (composti organico-inorganici), mentre la Figura 8 mostra il grafico ottenuto calcolando il numero totale di particelle (particelle più cluster più aggregati) identificato per 20 microl di ogni vaccino.

Nome	Detriti totali n.	Gamma di dimensioni in m m	Cluster n.	Gamma di dimensioni in mm	Aggregato n. (Gamma di particelle)	Gamma di dimensioni m m
allergoidi	Precipitati di NaCl	/	/	/	/	/
Typhim Vi	394	0,1-2,5			3 [9-350]	2-35
Tetabulin	519	0,1-15			3 [100-180]	25-60
Vivotif Berna	4	1,5-15
Inflessale V	103	0,1-17	1	20	3 [35-45]	10-25
Anatetall	2	1-3
Morupar	/		/		/
Mencevax ACWY	13	0,2-5
Infanrix	3	1-5	1	25
Infanrix hexa	1821	0,1-15			15 [1820]	20-140
Infanrix hexa	162	0,3-7	12	60	2 [7 detriti]	3,5-44
Typherix	8	0,2-8	1	15
Priorix	641	0,05-30	1	10	3 [600]	20-70
Engerix-B	precipitati			/
Varilrix	2723	0,1-4			36 [120-2000]	15-40
Fluarix	1317	0,1-40			3 [83]	7-30
Cervarix	1569	0,2-3	2	5-10	4 [1400]	8-30
Anatetall	47	0,05-40
Dif-Tet-All	111	0,2-3
Menjugate	73	0,1-5
Focetria	35	0,7-10
Agrippal S1	430	0,2-6	13	0,2-80	5 [410]	20
Agrippal S1	1029	0,1-12			9 [1025]	35-80
AGRIPPAL	480	0,1-6			11 [460]	2-80
Fluad	605	0,2-15	4	12-25	6 [600]	70
Menveo	452	0,1-13			4 [430]	30-110
Prenevar 13	precipita + 5 detriti	1-7
Prevenar 13	precipita + 81 detriti	0,2-50	3	5-40	1 [60]	25
Meningitec	3	10-20
Meningitec	24	8-60
Meningitec	673	0,1-20	1	7	9 [624]	5-110
Meningitec	precipitati + 40	0,1-3,5			2 [40]	25-70
Meningitec	177	0,2-10			3 [165]	15-100
Meningitec	241	0,1-15	1	50	2 [230]	50
Vaxigrip	86	0,1-7			2 [50]	2-2,5
Stamaril Pasteur	152	0,1-7	2	5-7	3 [145]	4-20
Gardasil	304	0,05-3			1 [300]	15
Gardasil	454	0,1-30	2	7-20	9 [445]	5-60
Vaxigrip	304	0,1-10	1	13	2 [300]	35
Vaxigrip	674	0,3-25	2	2-12	10 [660]	9-150
Repevax	137	0,1-20			2 [130]	40-50
Repevax	214	0,1-10			6 [150]	5-30
MMR vaxPro	93	0,1-15			2 [50]	Ott-15
Feligen CRP	92	0,1-12	1	12	1 (40 detriti)	25

Tabella 3: Elenco del numero di detriti identificato in ciascun vaccino come singola particella, cluster e aggregati. La caratterizzazione è fatta da forma, intervallo di dimensioni e variabilità del numero di particelle contate in ciascun aggregato [tra parentesi].

Figura 8: Grafico delle quantità di detriti identificate in una goccia da 20 microl di ciascun vaccino.

Aggregati simili sono già stati descritti da altri scienziati che li hanno identificati nel sangue, ad esempio nei pazienti leucemici [15] e in soggetti affetti da crioglobulinemia [16].

Non tutti i vaccini analizzati contengono la stessa contaminazione, anche se lo stesso vaccino appartenente a lotti diversi e, in alcuni casi, proveniente da paesi diversi può contenere una contaminazione simile (ad esempio i vaccini di Glaxo Infarix, Typherix e Priorix contengono tungsteno. identificato nel kit Menjugate di Novartis e Prevenar, Meningitec di Pfizer e Meningitec di Wyeth).]

Feligen, l'unico vaccino veterinario testato, si è rivelato l'unico campione privo di contaminazione inorganica, mentre l'allergoide genera uno strato di sali inorganici così denso da non consentire di rilevare altri contaminanti da particolato.

Discussione

La quantità di corpi estranei rilevati e, in alcuni casi, le loro insolite composizioni chimiche ci hanno sconcertato. Le particelle inorganiche identificate non sono né biocompatibili né biodegradabili, ciò significa che sono biopersistenti e possono indurre effetti che possono diventare evidenti o immediatamente vicini al tempo di iniezione o dopo un certo tempo dalla somministrazione. È importante ricordare che le particelle (cristalli e non molecole) sono corpi estranei all'organismo e si comportano come tali. Più in particolare, la loro tossicità è per alcuni aspetti diversa da quella degli elementi chimici che li compongono, aggiungendo a quella tossicità che, in ogni caso, è ancora presente, quella tipica di corpi estranei. Per tale motivo, inducono una reazione infiammatoria.

Dopo l'iniezione, tali microparticelle, nanoparticelle e aggregati possono rimanere attorno al sito di iniezione formando gonfiori e granulomi [17]. Ma possono anche essere trasportati dalla circolazione sanguigna, sfuggendo a qualsiasi tentativo di indovinare quale sarà la loro destinazione finale. Riteniamo che in molti casi si distribuiscano in tutto il corpo senza causare alcuna reazione visibile, ma è anche probabile che, in alcune circostanze, raggiungano un certo organo, nessuno escluso, incluso il microbiota, in discrete quantità. Come accade con tutti i corpi estranei, in particolare quelli piccoli, inducono una reazione infiammatoria cronica perché la maggior parte di quelle particelle non può essere degradata. Inoltre, l'effetto proteina-corona (dovuto a una nano-bio-interazione [18]) può produrre particelle composite organiche / inorganiche in grado di stimolare il sistema immunitario in modo indesiderato [19-22]. È impossibile non aggiungere che particelle delle dimensioni spesso osservate nei vaccini possono entrare nei nuclei cellulari e interagire con il DNA [23].

In alcuni casi, ad esempio come accade con il ferro e alcune leghe di ferro, possono corrodersi e i prodotti di corrosione esercitano una tossicità per i tessuti [24-26].

Il rilevamento della presenza di sali di alluminio e NaCl è ovvio in quanto sono sostanze utilizzate dai produttori e dichiarate come componenti, ma non si suppone che altri materiali siano presenti nel vaccino o in qualsiasi altro farmaco iniettabile, e, in ogni caso , L'alluminio è già stato associato a malattie neurologiche [27-29].

Date le contaminazioni che abbiamo osservato in tutti i campioni di vaccini per uso umano, gli effetti negativi dopo l'iniezione di tali vaccini sono possibili e credibili e hanno il carattere di casualità, poiché dipendono da dove i contaminanti sono trasportati dalla circolazione sanguigna. È ovvio che quantità simili di questi corpi estranei possono avere un impatto più grave su organismi molto piccoli come quelli dei bambini. La loro presenza nei muscoli, a causa di uno stravaso dal sangue, potrebbe compromettere pesantemente la funzionalità muscolare [30,31].

Incontriamo particelle con composizioni chimiche, simili a quelle trovate nei vaccini che abbiamo analizzato, quando studiamo casi di contaminazione ambientale causati da diverse fonti di inquinamento. Nella maggior parte dei casi, le combinazioni rilevate sono molto strane in quanto non hanno un uso tecnico, non possono essere trovate in nessun manuale del materiale e sembrano il risultato della formazione casuale che si verifica, ad esempio, quando i rifiuti vengono bruciati. In ogni caso, qualunque sia la loro origine, non dovrebbero essere presenti in alcun medicinale iniettabile, figuriamoci nei vaccini, più in particolare quelli destinati ai bambini.

Altre forme di contaminazioni finora sconosciute sono state recentemente osservate e, in ogni caso, i vaccini contengono componenti che potrebbero a loro volta essere la causa di effetti avversi. È un fatto ben noto in tossicologia che i contaminanti esercitano un effetto reciproco e sinergico e quando il numero di contaminanti aumenta, gli effetti diventano sempre meno prevedibili. Tanto più quando alcune sostanze sono sconosciute.

È un dato di fatto, non esistono dati ufficiali esaustivi e affidabili sugli effetti collaterali indotti dai vaccini. Le prove episodiche riportate da persone presumibilmente danneggiate dai vaccini sono duplici: alcuni sostengono che il danno si sia verificato e sia diventato visibile entro poche ore dalla somministrazione, e alcuni sostengono che si trattasse di alcune settimane. Sebbene non abbiamo prove indiscutibili sull'affidabilità di tali attestati, possiamo avanzare un'ipotesi per spiegare i diversi fenomeni. Nel primo caso, le sostanze inquinanti contenute nel farmaco hanno raggiunto il cervello e, a seconda del sito anatomico interessato, hanno indotto una reazione. In tal caso, l'intero fenomeno è molto rapido. In quest'ultima circostanza, le sostanze inquinanti hanno raggiunto il microbiota, interferendo così con la produzione di enzimi necessari per svolgere le funzioni neurologiche [32-35]. Tale possibilità richiede tempo, poiché comporta la produzione di composti chimici in quantità sufficiente ed è ragionevole un intervallo di alcune settimane tra l'iniezione e l'evidenza clinica. Certo, la nostra non è altro che un'ipotesi aperta alla discussione e bisognosa di prove, nella speranza che sia consentita un'ulteriore indagine.

Conclusione

Le analisi effettuate mostrano che in tutti i campioni i vaccini controllati contengono corpi estranei non biocompatibili e bio-persistenti che non sono dichiarati dai produttori, nei confronti dei quali l'organismo reagisce in ogni caso. Questa nuova indagine rappresenta un nuovo controllo di qualità che può essere adottato per valutare la sicurezza di un vaccino. La nostra ipotesi è che questa contaminazione non è intenzionale, poiché è probabilmente dovuta a componenti o procedure inquinate di processi industriali (ad es. Filtrazioni) utilizzate per produrre vaccini, non studiate e non rilevate dai produttori. Se la nostra ipotesi è effettivamente il caso, un'attenta ispezione dei luoghi di lavoro e la piena conoscenza dell'intera procedura di preparazione del vaccino probabilmente consentirebbero di eliminare il problema.

Un'ulteriore purificazione dei vaccini potrebbe migliorare la loro qualità e probabilmente ridurre il numero e la gravità degli effetti collaterali avversi.

Riconoscimento

Gli autori sono in debito con la dott.ssa Federico Capitani, la dott.ssa Laura Valentini e la sig.ra Lavinia Nitu per la loro assistenza tecnica. Le opinioni e le conclusioni non sono necessariamente quelle dell'istituzione.

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Fonte https://medcraveonline.com/IJVV/IJVV-04-00072